Материалы и методы

Исследование выполнено на 20 крысах массой 200-300г., разделенных на группы по 10 животных (рис. 1).

У крыс, находящихся под эфирным наркозом, вскрывали грудную клетку, извлекали сердце. В отверстие аорты вставляли канюлю от аппарата "изолированное сердце" (рис. 2) и начинали пропускать через нее подогретый до 37-39оС аэрированный раствор Кребса-Хензелейта. Данный раствор по физико-химическим характеристикам близок к составу крови. Ток перфузируемой жидкости захлопывает полулунные клапаны, и питающий раствор устремляется по коронарным сосудам. Сердце начинает сокращаться. Сокращающееся сердце фиксировали к канюле. Перфузионную жидкость, прошедшую через сердце, собирали в эппиндорфы для дальнейших биохимических исследований (определение маркеров ишемического повреждения - КФС-МВ, тропонин М и I).

Первая опытная группа включала животных, которых подвергли ишемии путем прекращения поступления питающего раствора на 40 минут. Так моделировалась ишемия. Вторая группа служила контролем.

После проведенных экспериментов наблюдали за сокращением изолированного сердца в течение 2 часов. По истечении данного времени получали 4 поперечных среза от каждого сердца и помещали в емкости с буферным раствором ( ph=7,4) и раствором трифенил тетразолия хлорида (ТТХ). Данные емкости помещали в термостат на 15 минут до образования красного формазана. Раствор ТТХ окрашивает живую ткань с сохраненной лактатдегидрогеназной активностью, а ишемизированную ткань с утраченной ферментной активностью не окрашивает. Окрашенные срезы фотографировали, затем обрабатывали с помощью программы Adobe Photoshop для более точной оценки площади ишемизированной ткани. [7, 9, 10]